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電泳帶型分析
電泳帶型分析
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于電泳帶型分析:
DNA電泳需要進(jìn)行帶型分析,在實(shí)驗(yàn)過程中常會(huì)發(fā)現(xiàn)所得的帶型出現(xiàn)在這樣那樣的問題。在此,我們對(duì)DNA帶型做了相應(yīng)的分析。
帶型
原因分析
解決辦法
弱帶或無帶
上樣的DNA量不夠
增加DNA的上樣量,聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈敏度稍高
DNA降解
避免DNA的核酸酶污染
電泳時(shí)間過長(zhǎng),DNA跑出
減短電泳時(shí)間,降低電壓,增強(qiáng)凝膠濃度
EB染色的DNA,紫外光源不合適
應(yīng)用短波長(zhǎng)(254nm),增強(qiáng)紫外燈靈敏度
DNA帶缺失
小DNA帶走出凝膠
減短電泳時(shí)間,降低電壓,增強(qiáng)凝膠濃度
分子大小相近的DNA帶不易分辨
增加電泳時(shí)間,核準(zhǔn)正確的凝膠濃度
DNA 變性
電泳前請(qǐng)勿高溫加熱DNA鏈,以20mM NaCl Buffer稀釋DNA
巨大DNA鏈,凝膠電泳不合適
在脈沖凝膠電泳上分析
DNA帶模糊
DNA降解
避免核酸酶污染
DNA上樣量過多
減少凝膠中DNA上樣量
所用電泳條件不合適
電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過20V/cm,溫度<30℃,巨大DNA鏈,溫度應(yīng)<15℃,核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力
DNA樣含鹽過高
電泳前通過乙醇沉淀去除過多的鹽
有蛋白污染
電泳前酚抽提去除蛋白
DNA變性
電泳前勿加熱,用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA
不規(guī)則DNA帶遷移
對(duì)于λ/Hind III片段COS位點(diǎn)復(fù)性
電泳前加熱DNA 65℃加熱5-10分鐘,然后在冰上冷卻5分鐘
電泳條件不合適
電泳電壓不超過20V/cm,溫度<30℃,電泳緩沖液有足夠的緩沖能力
DNA變性
以20mM NaCl Buffer稀釋DNA,電泳前勿加熱
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于電泳帶型分析。
我們上海金鵬分析儀器有限公司是專業(yè)生產(chǎn)
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